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一:
熒光定量pcrct技術(shù)百科
問(wèn)題1:熒光定量PCR的CT過(guò)小是為什么啊,不是說(shuō)基準(zhǔn)線是3到15個(gè)循環(huán),出現(xiàn)在這個(gè)
答:這是因?yàn)镈NA復(fù)制量未達(dá)到儀器檢測(cè)到的水平,但實(shí)際PCR循環(huán)卻真實(shí)進(jìn)行,反映在儀器曲線上為基線,直到量變達(dá)到質(zhì)變時(shí),才會(huì)被儀器檢測(cè)到,變成指數(shù)增長(zhǎng)期。
問(wèn)題2:什么是實(shí)時(shí)熒光定量PCR,檢測(cè)指標(biāo)是什么?
答:實(shí)時(shí)熒光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR,RTFQPCR)是1996年由美國(guó)AppliedBiosystems公司推出的一種新定量試驗(yàn)技術(shù),它是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)。
問(wèn)題3:實(shí)時(shí)熒光定量pcr因子表達(dá)量越少ct值越小嗎
熒光定量pcrct答:所謂Ct值,就是最先出現(xiàn)超過(guò)閾值信號(hào)的那個(gè)循環(huán)數(shù)?;蛘哒f(shuō)是到了第幾個(gè)循環(huán)才出現(xiàn)超過(guò)閾值的信號(hào)。C代表的是cycle,循環(huán)數(shù)目,T代表的是threshold,閾值。所以表達(dá)量越少的話,需要越多的循環(huán)才能擴(kuò)增出來(lái)。也就是CT值越高。
問(wèn)題4:實(shí)時(shí)熒光定量PCR的原理
熒光定量pcrct答:所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。檢測(cè)方法1SYBRGreenⅠ法:在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光。
問(wèn)題5:實(shí)時(shí)熒光定量PCR與普通PCR的區(qū)別是什么?結(jié)果有何異同?能說(shuō)明的問(wèn)題是什
答:實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。參考資料來(lái)源:百度百科-實(shí)時(shí)熒光定量PCR參考資料來(lái)源:百度百科-PCR。
問(wèn)題6:求助熒光定量PCR,我的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的目的基因CT值非常相近,但是兩組
答:肯定不行的。熒光定量pcr通過(guò)以內(nèi)參基因作為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行相對(duì)定量,即眾所周知的2–ΔΔCT法,(前提是要求在所有測(cè)試樣本中恒定表達(dá)的已知參照基因,而且表達(dá)水平不受研究條件及處理方式的影響)。如果實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的目的基因。
問(wèn)題7:實(shí)時(shí)熒光定量PCRCT值偏大的原因是什么
答:CT值偏大是因?yàn)閿U(kuò)增產(chǎn)物量低引起的,而后者的原因很多,比如底物濃度低,引物效率低,有抑制反應(yīng)的物質(zhì)存在等等。
問(wèn)題8:實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果是怎樣分析的
答:1、如果有標(biāo)準(zhǔn)曲線,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算。2、一般都是相對(duì)量,則用deltadeltaCT方法來(lái)計(jì)算。3、舉例如下:對(duì)照組基因A的CT值為20,內(nèi)參(比如βactin)CT值15。實(shí)驗(yàn)組基因ACT值18,內(nèi)參CT值14。4、首先算加樣量:。
問(wèn)題9:熒光定量PCR的簡(jiǎn)單解釋
熒光定量pcrct答:熒光定量PCR是(realtimefluores-cencequantitativePCR,RTFQPCR)是1996年由美國(guó)AppliedBiosystems公司推出的一種新定量試驗(yàn)技術(shù),它是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)。
問(wèn)題10:實(shí)時(shí)熒光定量pcr因子表達(dá)量越少ct值越小嗎
熒光定量pcrct答:所謂Ct值,就是最先出現(xiàn)超過(guò)閾值信號(hào)的那個(gè)循環(huán)數(shù)。或者說(shuō)是到了第幾個(gè)循環(huán)才出現(xiàn)超過(guò)閾值的信號(hào)。C代表的是cycle,循環(huán)數(shù)目,T代表的是threshold,閾值。所以表達(dá)量越少的話,需要越多的循環(huán)才能擴(kuò)增出來(lái)。也就是CT值越高。
二:
熒光定量pcrct技術(shù)資料
問(wèn)題1:熒光定量pcrct值每次重復(fù)相差多少
熒光定量pcrct答:如果有標(biāo)準(zhǔn)曲線,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算。一般都是相對(duì)量。則用deltadeltaCT方法來(lái)計(jì)算。舉例如下:對(duì)照組基因A的CT值為20,內(nèi)參(比如βactin)CT值15。實(shí)驗(yàn)組基因ACT值18,內(nèi)參CT值14。首先算加樣量:deltaCT=15。
問(wèn)題2:請(qǐng)問(wèn):做熒光定量PCR時(shí),△△Ct值是什么意思,它的計(jì)算公式是什么_百度知
答:△△Ct這是相對(duì)熒光定量的一個(gè)計(jì)算公式的簡(jiǎn)化形式,用于比較不同樣品之間的差別或變化比率。Ct=-klgX0+b(線性方程)用這個(gè)方程可以通過(guò)Ct值算出樣品的起始濃度斜率=-1/lg(1+e)擴(kuò)增效率E=1,斜率=-332擴(kuò)增。
問(wèn)題3:定量pcr中CT值的定義
熒光定量pcrct答:Ct值:C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是:每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào),熒光域值的缺省設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。
問(wèn)題4:什么是實(shí)時(shí)熒光定量PCR?有什么作用?請(qǐng)?jiān)敿?xì)說(shuō)明。
熒光定量pcrct答:實(shí)時(shí)熒光定量PCR即RealtimePCR(也稱實(shí)時(shí)定量PCR)定量PCR已經(jīng)從基于凝膠的低通量分析發(fā)展到高通量的熒光分析技術(shù),即實(shí)時(shí)定量PCR。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)AppliedBiosystems公司推出,由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性。
問(wèn)題5:熒光定量PCRCt值很高,都是30幾,怎么辦
答:看了你空間里的溶解曲線,你可以看到溶解峰的溫度都很低,全在80以下,你擴(kuò)出來(lái)的東西多半只是引物,你跑定量的時(shí)候有做NTC的孔嗎,如果有做,可以對(duì)照NTC組和加了模板的組,溶解峰還是一樣的話,那你擴(kuò)出來(lái)的產(chǎn)物100%。
問(wèn)題6:實(shí)時(shí)定量pcr的CT值在什么范圍內(nèi)算作合理
答:通常情況下,我們認(rèn)定為15到35CT比較合理,超過(guò)35個(gè)CT那么就算它沒(méi)有擴(kuò)增了,如果15之前起峰,那么就是模板濃度太高所引起的,如果發(fā)文章,那么建議你控制在15到35之間吧。
問(wèn)題7:熒光定量PCR,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的目的基因CT值非常相近,兩組內(nèi)參基因的CT
熒光定量pcrct答:回答如下:不正常。熒光定量pcr通過(guò)以內(nèi)參基因作為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行相對(duì)定量,即眾所周知的2–ΔΔCT法,(前提是要求在所有測(cè)試樣本中恒定表達(dá)的已知參照基因,而且表達(dá)水平不受研究條件及處理方式的影響)。如果實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的目的。
問(wèn)題8:做熒光定量PCR時(shí),△△Ct值是什么意思,它的計(jì)算公式是什么
答:△△Ct=△Ct(試驗(yàn)樣品)—△Ct(基準(zhǔn)樣品)△Ct(試驗(yàn)樣品)=Ct(試驗(yàn)樣品,目的基因)—Ct(試驗(yàn)樣品,內(nèi)參基因)△Ct(基準(zhǔn)樣品)=Ct(基準(zhǔn)樣品,目的基因)—Ct(基準(zhǔn)樣品,內(nèi)參基因)2-△△Ct=2-。
問(wèn)題9:熒光定量PCR中的Ct值是指指PCR擴(kuò)增過(guò)程中,擴(kuò)增產(chǎn)物熒光強(qiáng)度首次超過(guò)設(shè)
熒光定量pcrct答:嗯,是循環(huán)數(shù)。Ct值也是一個(gè)判斷初始模板濃度高低的指標(biāo)。Ct值越低,說(shuō)明模板越多。
問(wèn)題10:實(shí)時(shí)熒光定量pcr因子表達(dá)量越少ct值越小嗎
熒光定量pcrct答:所謂Ct值,就是最先出現(xiàn)超過(guò)閾值信號(hào)的那個(gè)循環(huán)數(shù)?;蛘哒f(shuō)是到了第幾個(gè)循環(huán)才出現(xiàn)超過(guò)閾值的信號(hào)。C代表的是cycle,循環(huán)數(shù)目,T代表的是threshold,閾值。所以表達(dá)量越少的話,需要越多的循環(huán)才能擴(kuò)增出來(lái)。也就是CT值越高。
三 :
熒光定量pcrct名企推薦
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